1/ Définition :

Le terme extemporané signifie « qui se fait à l’instant même ». L’examen extemporané consiste donc à une analyse macroscopique et microscopique « rapide » d’un prélèvement cytologique ou tissulaire. Il s’agit d’un examen nécessitant plusieurs acteurs : la partie technique est réalisée par le technicien de laboratoire ; l’analyse macroscopique et microscopique est réalisée par le médecin pathologiste.

2/ Objectif :

L’objectif de l’examen extemporané est d’aider à la prise de décision thérapeutique. Le circuit technique classique d’un prélèvement s’étale sur plusieurs jours car il nécessite une inclusion en paraffine. Cependant dans certaines situations, en particulier lors d’une chirurgie, il est nécessaire d’obtenir un résultat rapidement afin de guider la suite de la prise charge.

Voici quelques exemples :

• est-ce que les limites de résection chirurgicale sont en tissu sain ? si les limites sont en tissu tumoral, il sera nécessaire de faire une exérèse tissulaire supplémentaire.
• est-ce que le ganglion sentinelle (1er de la chaine ganglionnaire) est métastatique ? Si oui, une exérèse de l’ensemble de la chaine ganglionnaire est nécessaire (curage)
• est-ce un nodule de carcinose péritonéale ? Si oui, il est nécessaire soit de réaliser une exérèse plus large si possible soit d’arrêter la chirurgie)

3/ Principe général :

Pour les prélèvements tissulaires :

L’examen macroscopique va permettre de sélectionner un fragment d’intérêt afin de répondre à la question posée par le médecin ayant prescrit l’examen. Ce fragment est congelé dans un cryostat (appareil permettant la congélation) et coupé en de fines lamelles (cryocoupes) avec un microtome. Cet appareil permet de réaliser des coupes d’un prélèvement, mesurant de 2 à 25 micromètres d’épaisseur, à l’aide d’une lame de rasoir. Les cryocoupes sont ensuite étalées sur une lame de microscope puis colorées pour une analyse microscopique immédiate.

Pour les prélèvements cytologiques (cytoponction ou appositions de biopsie) :

Le matériel est directement étalé sur une lame puis coloré pour une analyse microscopique.

4/ Etapes :

Horodater :

L’examen extemporané est « minuté » et nnécessite d’être répondu en moins de 30 minutes. Dès l’arrivée du prélèvement celui-ci est donc horodaté.

Enregistrement :

Afin d’éviter toute erreur, il est nécessaire de vérifier l’identité du patient sur le bon de demande et sur le flacon contenant le prélèvement.

Ensuite, le prélèvement est enregistré informatiquement avec attribution d’un numéro. Ce numéro permettra la traçabilité durant l’ensemble des étapes.

Appel du pathologiste :

Le technicien de laboratoire prévient le pathologiste de garde qu’un examen extemporané est demandé. Le pathologiste doit se rendre disponible immédiatement.

Examen macroscopique :

Le prélèvement est mesuré dans les 3 dimensions. Son aspect est décrit (couleur, consistance, forme, etc…). Si une lésion est identifiée, celle-ci est décrite et mesurée.

Dans de rares situations, l’examen extemporané peut s’arrêter à cette étape. C’est le cas par exemple de l’analyse des marges tissulaires des pièces de tumorectomie mammaire.

Dans la majorité des cas, un examen microscopique est nécessaire. Pour cela, le pathologiste sélectionne un fragment d’intérêt. 

Congélation :

Le fragment choisi est déposé sur un socle. Il est recouvert par un gel d'inclusion, qui se compose de polyéthylène glycol et d’alcool polyvinylique et qui lorsqu'il est congelé, a la même densité que le tissu congelé. Le fragment sur son socle est déposé dans le cryostat pour une congélation à -20°c.

Cryocoupe :

A l’aide du microtome, le technicien de laboratoire va dégrossir le prélèvement afin de visualiser l’ensemble du prélèvement sur un même plan. Puis il va réaliser une cryocoupe définitive à 4 micromètres d’épaisseur. Cette cryocoupe sera déposée sur une lame de microscope (aussi appelée lame blanche car non colorée). Généralement plusieurs niveaux de cryocoupes sont réalisés.

Coloration :

La lame de microscope est passée dans plusieurs bains successifs :

• Formol : 10 secondes. Cette étape permet de fixer le prélèvement, c’est-à-dire d’arrêter toute réaction enzymatique.
• Hémalun : 30 secondes. Ce colorant bleu, de nature basique, va colorer les composants acides des cellules, donc principalement les noyaux qui sont riches en acide désoxiribonucléique (ADN).
• Eosine : 15 secondes. Ce colorant rose, de nature acide, va colorer les composants basiques des cellules, donc principalement le cytoplasme des cellules qui sont riches en protéines.
• Alcool : aller-retour afin de débarrasser la lame de l’eau et de permettre le montage de la lamelle en verre.
• Xylène : aller-retour, facilite le montage de la lamelle en verre.

Entre chaque bain, la lame est rincée à l’eau.

Préparation finale (montage) :

Une lamelle est collée sur le prélèvement afin de ne pas l’abimer.

Examen microscopique :

A l’aide du microscope, le pathologiste analyse le tissu afin de répondre à la question posée.

Rédaction d’un compte-rendu :

Ce compte-rendu est rédigé immédiatement. Il précise les données macroscopiques et microscopiques.

Communication du résultat au médecin prescripteur de l’examen extemporané :

La communication immédiate est faite le plus souvent par téléphone. Le pathologiste précise son identité, celle du patient ayant fait l’objet de l’examen extemporané puis donne ses observations macroscopiques et microscopiques.

Préparation du fragment analysé pour l’examen définitif :

La qualité des lames produites par coupes congelées est inférieure à celle d’un prélèvement inclus en paraffine. Cette technique n'est pas vouée à rendre un diagnostic définitif, et devra toujours être vérifiée a posteriori par examen standard. Pour cela, le prélèvement est décongelé puis sera intégré dans le parcours classique des prélèvements (fixation formolée pour une future inclusion en paraffine).

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Natacha JOYON - Jérémy BOUKHERIS - GUSTAVE ROUSSY - Mise à jour en juillet 2024